Application du laparoscope vétérinaire dans la collection d'ovocytes bovins Fécondation in vitro
Application du laparoscope vétérinaire à la collecte d'ovocytes bovins en fécondation in vitro.
Le taux de récupération des ovocytes prélevés par technique laparoscopique est plus simple que celui de la collecte des ovules directement à partir de l'ovaire. De plus, la laparoscopie vétérinaire peut être utilisée pour vérifier le développement folliculaire.
Insertion du laparoscope : insérez le trocart émoussé dans la canule, insérez la canule dans le vagin, positionnez l'extrémité avant de la canule à la position prédéterminée de la voûte vaginale à travers la prise rectale, puis retirez le trocart émoussé, insérez le trocart pyramidal et régler l'angle. Déplacer la direction du trocart et le grand axe de la vache légèrement vers la droite à un angle de 10°, et pénétrer avec force dans la voûte vaginale vers le haut. Si la résistance diminue brutalement, cela indique que la voûte vaginale a été percée. À ce moment, sortez le trocart. Lorsque vous entendez le bruit de l'air qui entre et que la main tenant le rectum ressent en même temps l'expansion de la cavité abdominale, cela indique que la position de perçage est correcte. La gaine en acier inoxydable avec le corps de l'endoscope est insérée dans le manchon. Selon la sensation du rectum, si la cavité est petite, elle doit être remplie de CO2. La vitesse de l'admission d'air doit généralement être contrôlée à 7~L/min. La quantité de gaz remplie dépend de la taille de la vache."Généralement, il est d'environ 9L.
Prélèvement d'ovocytes : L'opérateur de saisie rectale doit constamment ajuster la position du laparoscope et de l'ovaire, et afficher la forme des follicules et du corps jaune à différentes positions sur l'ovaire, afin de déterminer les follicules qui doivent être ponctionnés. Un assistant saisit le mot de passe de l'opérateur et le follicule affiché à l'écran en fonction du rectum, actionne l'aiguille de ponction, recueille le liquide folliculaire et met le liquide folliculaire dans le tube de collecte qui a été ajouté avec une petite quantité de liquide de culture. Un autre assistant est responsable du fonctionnement de la pompe à vide à pied. Afin d'éviter la perte d'ovocytes, la pompe à vide doit être démarrée (la pression négative doit être de 100 mm Hg) avant la ponction. Après la collecte, le liquide folliculaire est placé dans le support de tubes à essai pendant 5 à 10 minutes, et le liquide folliculaire au fond du tube de collecte est aspiré dans la plaque avec une paille, puis observé au microscope optique. Et les ovocytes détectés sont aspirés dans le tube mince. Les deux extrémités du tube mince sont scellées et les ovocytes peuvent être transportés au laboratoire pour une culture mature. Une fois l'opération terminée, le canon de l'endoscope est retiré et les deux assistants appuient sur les deux côtés de la paroi abdominale de la vache pour expulser le gaz dans la cavité abdominale. Lorsque le gaz n'est plus déchargé, la canule est retirée et le vagin est vérifié tous les deux jours pour prévenir l'infection. Les deux extrémités du tube mince sont scellées et les ovocytes peuvent être transportés au laboratoire pour une culture mature. Une fois l'opération terminée, le canon de l'endoscope est retiré et les deux assistants appuient sur les deux côtés de la paroi abdominale de la vache pour expulser le gaz dans la cavité abdominale. Lorsque le gaz n'est plus déchargé, la canule est retirée et le vagin est vérifié tous les deux jours pour prévenir l'infection. Les deux extrémités du tube mince sont scellées et les ovocytes peuvent être transportés au laboratoire pour une culture mature. Une fois l'opération terminée, le canon de l'endoscope est retiré et les deux assistants appuient sur les deux côtés de la paroi abdominale de la vache pour expulser le gaz dans la cavité abdominale. Lorsque le gaz n'est plus déchargé, la canule est retirée et le vagin est vérifié tous les deux jours pour prévenir l'infection.
Précautions:
1. Anesthésie : ni trop superficielle ni trop profonde. Une anesthésie efficace est une condition préalable à la réalisation de la ponction folliculaire pour obtenir des ovocytes. Si l'anesthésie est trop superficielle, la vache ressentira de la douleur et cela affectera la précision de l'opération, et l'anesthésie doit être complétée. Si l'anesthésie est trop profonde, la vache ne se tiendra pas de manière stable, voire ne se couchera pas, ce qui affectera également l'opération. Si la vache est couchée, l'opération doit être immédiatement arrêtée et la canule et le tube laparoscopique doivent être retirés rapidement. Dans le même temps, il faut veiller à libérer le Baoding à temps pour éviter de blesser la vache.
2. Ponction : La pince rectale doit saisir correctement l'angle de ponction lors de la ponction de la voûte vaginale pour éviter de perforer le rectum et le gros intestin. Lors de la ponction du follicule, l'aiguille ne doit pas être percée trop profondément, sinon elle endommagerait la substance ovarienne et provoquerait une hémorragie. Cela contaminera non seulement le liquide folliculaire, affectera la détection des ovocytes, bloquera les aiguilles et les canaux, mais affectera également le développement des follicules sur l'ovaire. se remettre. En cas de saignement, la ponction folliculaire doit être arrêtée immédiatement, l'aiguille et le cathéter et le tube de prélèvement doivent être remplacés, et l'aiguille et le cathéter doivent être rincés avec 0,01 mg d'héparine/ML de sérum physiologique avant la prochaine ponction folliculaire.
3. Collecte du liquide folliculaire : Le liquide folliculaire collecté doit être maintenu à une température constante autant que possible. Il est préférable de détecter les ovocytes immédiatement après le prélèvement, et de les mettre dans un milieu de culture mature contenant de la FSH, de les conditionner dans des tubes minces et de les transporter au laboratoire, généralement de la récolte à l'incubateur pour la culture de maturation ne doit pas dépasser 4h.
4. Compétences : L'utilisation réussie de cette méthode nécessite non seulement un bon équipement, mais exige également que l'opérateur ait un niveau élevé de connaissances et de maîtrise des opérations pratiques, ainsi qu'une coopération étroite avec deux assistants. Par conséquent, la formation nécessaire doit être effectuée avant l'opération expérimentale.
De plus, cette méthode peut également être utilisée pour obtenir à l'avance des ovocytes de jeunes vaches, augmentant ainsi la période d'utilisation et le potentiel reproducteur des vaches, et accélérant le progrès génétique. Cette méthode sera un bon moyen d'obtenir des sources d'ovules après la superovulation et l'utilisation d'ovaires isolés.
